浙江顯微鏡熒光染料

染料DiI, DiO, DiD 和 DiR是一類(lèi)親脂性熒光染料家族，用于標(biāo)記細(xì)胞膜和疏水性組織。這是一類(lèi)環(huán)境敏感型熒光染料，當(dāng)它們與膜結(jié)合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質(zhì)，雖然在水中其熒光強(qiáng)度很弱)結(jié)合時(shí)，其熒光強(qiáng)度***增強(qiáng)。它們具有很高的淬滅系數(shù)，偏光依賴(lài)性和很短的激發(fā)壽命。一旦應(yīng)用于細(xì)胞中，這種染料會(huì)在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)膜中逐步擴(kuò)散，導(dǎo)致在其比較好濃度條件下，將整個(gè)細(xì)胞染色。它們不同的熒光顏色：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光），為活細(xì)胞多色彩熒光成像分析和流式細(xì)胞術(shù)提供了一種便捷的工具。DiO和DiI可以分別與標(biāo)準(zhǔn)的FITC和TRITC濾光器一同使用。其中，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發(fā)，并且具有比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)和發(fā)射光波長(zhǎng)，為標(biāo)記細(xì)胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常***的替代品。DiR在***成像或者示蹤中非常有用，因?yàn)樗鼈兯l(fā)射的紅外光可以高效地穿過(guò)細(xì)胞和組織，并且在紅外光范圍內(nèi)，其本底熒光水平很低。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀Ｕ憬@微鏡熒光染料

Cy5:激發(fā)波長(zhǎng)633/635nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測(cè);3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于APC。5)與單核和粒細(xì)胞非特異性結(jié)合多，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

5、PE:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè);3)其熒光泯滅性強(qiáng)，不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)，但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。

6、PE-TR:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)615nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè);2)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。

7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)628nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè);2)熒光強(qiáng)度高;3)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。 浙江顯微鏡熒光染料小動(dòng)物成像熒光染料能夠選擇性地與目標(biāo)細(xì)胞或組織結(jié)合。

一、體外生物發(fā)光試驗(yàn)熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無(wú)菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無(wú)菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動(dòng)至熒光素完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲(chǔ)存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析-注射器濾膜過(guò)濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對(duì)細(xì)胞進(jìn)行短時(shí)間孵育可增強(qiáng)信號(hào)。

PI是一種可對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)，常用于流式細(xì)胞儀分析。盡管PI不能通過(guò)活細(xì)胞膜，但卻能穿過(guò)破損的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。PI經(jīng)常被用來(lái)與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時(shí)對(duì)活細(xì)胞和死細(xì)胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為535nm和615nm。2.染色過(guò)程（1）將1/10培養(yǎng)基體積的PI染色液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基）。（2）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的緩沖液洗滌細(xì)胞兩次。（4）用535nm激發(fā)波長(zhǎng)，615nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光器的熒光顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞。儲(chǔ)存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項(xiàng)：PI對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。5(6)-FITC (Fluorescein 5(6)-isothiocyanate) 是一種胺活性衍生物的熒光染料.

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來(lái)染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度**增強(qiáng)，這類(lèi)染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對(duì)細(xì)胞染色，這類(lèi)染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來(lái)對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在***成像中用來(lái)示蹤。D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲(chóng)產(chǎn)生典型的黃綠色光。浙江顯微鏡熒光染料

小動(dòng)物成像熒光染料是一種先進(jìn)的技術(shù)可以在小動(dòng)物體內(nèi)實(shí)時(shí)觀(guān)察和研究細(xì)胞、組織的功能和代謝過(guò)程。浙江顯微鏡熒光染料

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線(xiàn)或可見(jiàn)光后，能把短波長(zhǎng)的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL(zhǎng)較長(zhǎng)的可見(jiàn)光波而反射出來(lái)，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個(gè)供體及一個(gè)受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長(zhǎng)被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長(zhǎng)發(fā)射一個(gè)光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開(kāi)發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見(jiàn)光及紅外的整個(gè)光譜范圍。浙江顯微鏡熒光染料